一、Fc受體在免疫細(xì)胞功能中扮演什么角色？

Fc受體（FcR）是一類(lèi)表達(dá)于免疫細(xì)胞表面的關(guān)鍵分子，能夠特異性結(jié)合抗體的Fc片段。當(dāng)抗體的Fab片段識(shí)別并結(jié)合抗原后，其Fc段與免疫細(xì)胞表面的Fc受體相互作用，激活下游信號(hào)通路，介導(dǎo)抗體依賴的細(xì)胞吞噬作用（ADCP）、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用（ADCC）及免疫復(fù)合物清除等多種效應(yīng)功能。Fc受體家族包括FcγRI（CD64）、FcγRII（CD32）、FcγRIII（CD16）等多個(gè)成員，分別對(duì)不同亞型IgG具有不同親和力，在單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、自然殺傷（NK）細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞及B細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面差異表達(dá)。其中FcγRIIb是抑制性受體，其胞內(nèi)含有免疫受體酪氨酸抑制基序（ITIM），介導(dǎo)免疫負(fù)調(diào)節(jié)。

二、Fc受體在免疫檢測(cè)中為何成為干擾源？

在流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化及免疫沉淀等檢測(cè)中，使用的抗體多為完整IgG分子，其Fc段可被細(xì)胞表面Fc受體非特異性識(shí)別結(jié)合。這一現(xiàn)象導(dǎo)致以下干擾：第一，F(xiàn)c受體陽(yáng)性細(xì)胞如巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞及B細(xì)胞可能通過(guò)Fc段非特異性結(jié)合檢測(cè)抗體，產(chǎn)生假陽(yáng)性信號(hào)，使本應(yīng)陰性的細(xì)胞群呈現(xiàn)陽(yáng)性染色。第二，非特異性結(jié)合增加背景噪聲，降低信噪比，影響稀有細(xì)胞亞群及低表達(dá)抗原的檢測(cè)靈敏度。第三，在功能實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)c受體結(jié)合可能意外激活或抑制免疫細(xì)胞，干擾對(duì)效應(yīng)功能的真實(shí)評(píng)估。因此，有效阻斷Fc受體非特異性結(jié)合，是確保免疫檢測(cè)特異性和準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。

三、FcR受體阻斷劑的工作原理是什么？

FcR受體阻斷劑是一類(lèi)專門(mén)用于封閉Fc受體的試劑，其核心組分通常為高濃度、無(wú)抗原結(jié)合活性的免疫球蛋白或特異性抗體片段。常用的阻斷劑包括純化的非特異性IgG、Fc片段或抗Fc受體單克隆抗體。將阻斷劑與細(xì)胞樣本預(yù)先孵育時(shí)，其與細(xì)胞表面Fc受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，占據(jù)受體結(jié)合位點(diǎn)。當(dāng)后續(xù)加入特異性檢測(cè)抗體時(shí)，檢測(cè)抗體僅能通過(guò)其Fab段與目標(biāo)抗原結(jié)合，而無(wú)法通過(guò)Fc段與受體結(jié)合，從而消除非特異性背景信號(hào)。針對(duì)不同物種及受體亞型，可選擇相應(yīng)的阻斷劑，如抗小鼠CD16/CD32抗體用于小鼠樣本，人血清或人IgG用于人源樣本。

四、FcR受體阻斷劑在流式細(xì)胞術(shù)中如何應(yīng)用？

在流式細(xì)胞術(shù)中，F(xiàn)cR阻斷是染色方案的標(biāo)準(zhǔn)步驟。對(duì)于小鼠來(lái)源樣本如脾細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞或腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞，染色前需用抗小鼠CD16/CD32抗體孵育10-15分鐘，封閉巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞及B細(xì)胞表面的FcγRIII及FcγRII。對(duì)于人源樣本，可使用人血清、人IgG或特異性抗人FcR抗體進(jìn)行阻斷。阻斷后加入熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色，可顯著降低巨噬細(xì)胞及B細(xì)胞等FcR陽(yáng)性細(xì)胞的非特異性背景，提高稀有細(xì)胞亞群如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）、樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）亞群的檢測(cè)準(zhǔn)確性。

在多色流式方案中，F(xiàn)cR阻斷尤為重要。非特異性結(jié)合導(dǎo)致的背景信號(hào)在多通道中可被放大，干擾補(bǔ)償調(diào)節(jié)及陽(yáng)性門(mén)設(shè)置。阻斷后各通道背景降低，數(shù)據(jù)質(zhì)量顯著提升。對(duì)于胞內(nèi)染色方案，需注意阻斷應(yīng)在表面染色前進(jìn)行，固定破膜后Fc受體構(gòu)象改變，阻斷效果下降。

五、FcR受體阻斷劑在免疫組化中如何應(yīng)用？

在免疫組化染色中，組織切片中的巨噬細(xì)胞等FcR陽(yáng)性細(xì)胞可非特異性結(jié)合檢測(cè)抗體，導(dǎo)致背景增高及假陽(yáng)性定位。染色前用阻斷劑孵育切片，可有效封閉Fc受體，提高染色特異性。尤其對(duì)于富含巨噬細(xì)胞的組織如脾臟、肝臟及腫瘤組織，F(xiàn)cR阻斷是獲得清晰染色結(jié)果的必要步驟。

對(duì)于石蠟切片，抗原修復(fù)過(guò)程可能暴露或改變Fc受體構(gòu)象，需優(yōu)化阻斷條件。通常推薦在血清封閉步驟中加入FcR阻斷劑，與二抗宿主同源的血清聯(lián)合使用，實(shí)現(xiàn)雙重封閉效果。

六、FcR受體阻斷劑在功能實(shí)驗(yàn)中如何應(yīng)用？

在ADCC等功能實(shí)驗(yàn)中，F(xiàn)c受體介導(dǎo)的效應(yīng)功能是研究終點(diǎn)，此時(shí)需避免FcR阻斷。但在某些實(shí)驗(yàn)中，需區(qū)分Fc段介導(dǎo)的非特異性效應(yīng)與Fab段介導(dǎo)的特異性效應(yīng)。此時(shí)可設(shè)置FcR阻斷對(duì)照組，比較阻斷前后效應(yīng)差異，評(píng)估Fc段貢獻(xiàn)。

在免疫復(fù)合物介導(dǎo)的細(xì)胞激活研究中，F(xiàn)cR阻斷可用于驗(yàn)證信號(hào)是否通過(guò)Fc受體傳遞。阻斷后效應(yīng)消失提示FcR參與，為機(jī)制研究提供證據(jù)。

七、提供FcR阻斷試劑的廠商有哪些？

杭州斯達(dá)特生物科技有限公司自主研發(fā)的FcR阻斷試劑（Human FcR Blocking Reagent, (Mouse anti-human CD16/32 & human antibody against CD64)）（貨號(hào)：S0F0002），是一款具有高效雙重阻斷能力、低非特異性結(jié)合及優(yōu)異種屬兼容性的Fc受體阻斷劑產(chǎn)品。該試劑采用抗人CD16/32單克隆抗體（小鼠源）與抗人CD64單克隆抗體（人源）組合設(shè)計(jì)，能夠全面有效阻斷人樣本中多種Fcγ受體介導(dǎo)的非特異性抗體結(jié)合，在流式細(xì)胞術(shù)免疫表型分析、多色方案設(shè)計(jì)、細(xì)胞分選及功能性實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域具有重要應(yīng)用價(jià)值。

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產(chǎn)品信息

杭州斯達(dá)特是優(yōu)寧維旗下品牌，志在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個(gè)開(kāi)發(fā)平臺(tái)：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開(kāi)發(fā)平臺(tái)（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）、一步法ELISA平臺(tái)，PTM泛修飾抗體平臺(tái)

FcR受體阻斷劑如何排除免疫檢測(cè)干擾？